El desarrollo del microscopio está fuertemente acoplado con
la evolución de la biología celular y la medicina. Los microscopios proporcionan
al observador una resolución mejorada (capacidad de observar dos objetos
cercanos como objetos independientes), contraste (capacidad de detectar las
diferentes regiones de la muestra sobre la base de la intensidad o color) y
amplificación (capacidad de hacer que los objetos pequeños visible). El ojo humano puede resolver
objetos del orden de 0,1 mm, mientras que el microscopio de luz puede resolver
objetos del orden de 0,2 mm (200 nm) con una ampliación de 1000.
Componentes del Microscopio de luz,
compuesto u óptico:
El microscopio de luz, compuesto u óptico está
integrado por 3 sistemas, los cuales son:
- 1.- Sistema Mecánico
- 2.- Sistema Óptico
- 3.- Sistema de Iluminación
Sistema Mecánico:
El sistema mecánico es el esqueleto o armazón
del microscopio, el cual proporciona soporte y estabilidad al equipo. Está
integrado por: El tubo de microscopio: El cual es de forma cilíndrica, en su
parte superior sostiene a la lente o lentes oculares y en la parte inferior se
encuentra el sistema de lentes objetivos. Revólver: Es la parte circular en la
que se encuentran atornilladas los diferentes lentes objetivos, al girar el
revolver cambian los lentes objetivos sin que se desenfoque la preparación.
Platina: Pieza metálica cuadrada o circular,
con un orificio central sobre el que se colocan las preparaciones a observar y
por el que atraviesa el rayo luminoso. Puede ser fija o estar provista de
tornillos de desplazamiento que nos permiten centrar la preparación o buscar
diferentes campos de observación.
Base o Pie: Es la base sobre la que descansa
el aparato y le da estabilidad.
Brazo o columna: Esla parte que sostiene el tubo y su mecanismo de
desplazamiento vertical formado por los tornillos macrométrico y micrométrico.
Sistema Óptico:
El
sistema Óptico está formado por 2 sistemas de lentes: Oculares y Objetivos.
Los lentes oculares van montados en la parte superior del tubo del microscopio.
Su nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador
y sus poderes de aumento van desde 4x hasta 20x.
Los
lentes objetivos se encuentran en el revólver y quedan cerca del objeto a observar.
Hay 2 tipos de objetivos: Objetivos secos y de Inmersión
Los
objetivos secos se utilizan sin colocar alguna sustancia entre ellos y la
preparación, únicamente el aire. Proporcionan poco aumento que va desde 10x ,
20x,40x hasta incluso 60x; dicho aumento se encuentra grabado en el exterior de
cada objetivo, en este caso encontramos 10x o también llamado seco débil y 40x
o seco fuerte.
Los
objetivos de inmersión se utilizan colocando una sustancia entre ellos y la
preparación, por lo general, se emplea el aceite de cedro. Proporcionan un
mayor aumento y definición, de 100x; los podemos identificar ya que son los más
largos y traen grabada en el exterior la palabra oil (aceite).
Sistema de Iluminación
El
sistema de Iluminación está formado por la fuente de iluminación, Espejo,
Condensador, y Diafragma.
La fuente de iluminación consta generalmente
de una lámpara incandescente de tungsteno.
El espejo es necesario si la fuente de iluminación no está dentro del
microscopio tiene una cara plana y una es cóncava.
El condensador de luz está formado por un
sistema de lentes cuya función es captar los rayos luminosos y dirigirlos hacia
la preparación que se va a enfocar.
El Diafragma es una abertura que controla la cantidad de luz que debe pasar por
el condensador, que se regula por una palanca lateral. (1)
El tipo de microscopio más
utilizado es el microscopio óptico, que se sirve de la luz visible para crear
una imagen aumentada del objeto. El microscopio óptico más simple es la lente
convexa doble con una distancia focal corta. Estas lentes pueden aumentar un
objeto hasta 15 veces. Por lo general se utilizan microscopios compuestos, que
disponen de varias lentes con las que se consiguen aumentos mayores. Algunos
microscopios ópticos pueden aumentar un objeto por encima de las 2.000 veces.
El
microscopio compuesto consiste en dos sistemas de lentes, el objetivo y el
ocular, montados en extremos opuestos de un tubo cerrado. El objetivo está
compuesto de varias lentes que crean una imagen real aumentada del objeto
examinado. Las lentes de los microscopios están dispuestas de forma que el
objetivo se encuentre en el punto focal del ocular. Cuando se mira a través del
ocular se ve una imagen virtual aumentada de la imagen real. El aumento total
del microscopio depende de las longitudes focales de los dos sistemas de
lentes.
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Microscopía
óptica normal (de
campo brillante coloreado): El material a observar se colorea con colorantes
específicos que aumentan el contraste y revelan detalles que no aprecian de
otra manera.
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Microscopía
de campo brillante: el
material se observa sin coloración. La luz pasa directamente y se aprecian
detalles que estén naturalmente coloreados.
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El
microscopio en campo oscuro utiliza
una luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen.
El campo de visión del objetivo se encuentra en la zona hueca del cono de luz
y sólo recoge la luz que se refleja en el objeto. Por ello las porciones claras
del espécimen aparecen como un fondo oscuro y los objetos minúsculos que se
están analizando aparecen como una luz brillante sobre el fondo. Esta forma
de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y
sin manchas, invisibles con iluminación normal.
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Microscopía
en contraste de fase: se
usa principalmente para aumentar el contraste entre las partes claras y
oscuras de las células sin colorear. Es ideal para especímenes delgados, o
células aisladas. El microscopio de fase ilumina el espécimen con un cono
hueco de luz, como en el microscopio en campo oscuro. Sin embargo en el
microscopio de fase el cono de luz es más estrecho y entra en el campo de
visión del objetivo, que contiene un dispositivo en forma de anillo que
reduce la intensidad de la luz y provoca un cambio de fase de un cuarto de la
longitud de onda. Este tipo de iluminación provoca variaciones minúsculas en
el índice de refracción de un espécimen transparente, haciéndolo visible.
Este tipo de microscopio es muy útil a la hora de examinar tejidos vivos, por
lo que se utiliza con frecuencia en biología y medicina.
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Nomarski,
microscopía diferencial de contraste de interferencia (DIC). Utiliza dos rayos de luz polarizada y las
imágenes combinadas aparecen como si la célula estuviera proyectando sombras
hacia un lado. Fue diseñado para observar relieves de especimenes muy
difíciles de manejar, es muy utilizado en los tratamientos de fertilización
in-vitro actuales. DIC se usa cuando el espécimen es muy grueso para usar
contraste de fases.
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Microscopía
de fluorescencia: una
sustancia natural en las células o un colorante fluorescente aplicado al
corte es estimulado por un haz de luz, emitiendo parte de la energía
absorbida como rayas luminosas: esto se conoce como fluorescencia. La luz
fluorescente de mayor longitud de onda se observa como si viniera
directamente del colorante. (2)
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(1)
Pérez, A. MA. I.; (2014); El
microscopio: Equipo fundamental en el laboratorio de Biología; Volumen 1 No.1
Enero 2014, Semestral; Universidad Autónoma del Estado de Hidalgo, Escuela
Preparatoria No. 3 Con-Ciencia, recuperado de https://www.uaeh.edu.mx/scige/boletin/prepa3/n1/m9.html
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